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1、首先，获得DNA片段，取得目的基因，载体的选择制备。
2、其次，DNA片段和载体DNA在体外链接，形成重组子。
3、最后，重组子的筛选与鉴定，筛选和鉴定转化细胞，获得外援基因高效表达的基因工程菌或细胞。
急急急！基因工程的操作顺序可以用五个字概括：切，接，增，转，检，说明他们所包
基因工程的操作过程的主要步骤：
切、接、转、增、筛（检）
切：获得DNA片段，取得目的基因；载体的选择制备。
方法：从生物基因组中分离得到——基因组DNA——>酶切产物
从总RNA重分离得到mRNA,再逆转录得到cDNA
人工合成——化学合成；PCR（聚合酶链式反应）
接：DNA片段和载体DNA在体外链接，形成重组子。
转：将重组的DNA进入宿主细胞。
方法：转化——某一基因型细胞从周围介入中吸收另一基因型细胞的DNA，而使其基因型和表型发生相应变化的形象；转染——出去蛋白质外壳的病毒核酸感染细胞或原生质体的过程；转导——用噬菌体做载体，将一个细胞的基因传递给另一个细胞的过程。还有显微注射等。
增：培养已转化细胞，使目的基因在其中进行复制，扩增，并将其整合到手提细胞的基因组中。
筛、检：重组子的筛选与鉴定。筛选和鉴定转化细胞，获得外援基因高效表达的基因工程菌或细胞。
我是一名湖南高三学生，这个刚好学过
切：找到目的基因，也就是那个最终要起作用的的基因，用限制性核酸内切酶将其切取出来，这样基因两头会都有“接口”，“接口有两种：平末端、黏性末端（注意：一种限制性核酸内切酶只可以用来切取一种基因）
接：找到载体（如最常用的为 质粒），将其用上面的同种限制性核酸内切酶切断，并将其与切取出来的基因用DNA聚合酶重组起来（注意：DNA聚合酶是通用的，可以用来组合不同的基因和质粒）
增：扩增目的基因载体，因为转基因工程需要不止一个载体，一个载体成功率极低，
转：（这个并非转录出mRNA，转录出mRNA是细胞自己的事，你想做也做不了）而是将运载体转入受体细胞，重用的方法：植物有基因枪法、花粉管通道法，动物常用显微注射法
检：有两种水平上的检验方法：1分子水平(两种）：A是基因分子探针法，用第一步切取出来的基因与受体细胞的mRNA杂交，如果能杂交，则以表达，反之则未表达；B是抗原－抗体杂交法，用细胞产生的蛋白质（基因工程的产物为蛋白质）作为抗体（抗体也为蛋白质）与抗原杂交，如成功，则表明实验成功2个体水平：这种方法一般适用于抗虫转基因作物，用虫去实验，看虫是否有所反应，如有反应，则整个实验也就成功了
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