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(1)基因工程的操作步骤:目的基因的获取→基因表达载体的构建→将目的基因导入受体细胞→目的基因的检测和鉴定.
(2)⑦是基因表达载体的构建过程,该过程首先需用限制酶切割含有目的基因的外源DNA分子和运载体,还需要用DNA连接酶将目的基因与运载体连接形成重组质粒.基因表达载体的组成包括启动子、目的基因、终止子和标记基因.
(3)由于皮肤细胞中的胰岛素基因未表达,不能形成胰岛素mRNA,因此不能利用人的皮肤细胞来完成①过程.
故答案为:
(1)目的基因的检测和鉴定
(2)限制性内切酶、DNA连接酶 终止子标记基因?
(3)不能?皮肤细胞中的胰岛素基因未表达,不能形成胰岛素mRNA.
基因工程的基本操作程序
基因工程的基本操作步骤主要包括四步:①目的基因的获取;②基因表达载体的构建;③将目的基因导入受体细胞;④目的基因的检测与鉴定.其中,基因表达载体的构建是基因工程的核心.
故答案为:
目的基因的获取、基因表达载体的构建、将目的基因导入受体细胞和目的基因的检测与鉴定
5)基因工程是在DNA分子水平上进行设计施工的。在基因操作的基本步骤中,不进行碱基互补配对的步骤是
基因工程的基本操作程序的内容如下:
基因工程的基本操作程序指的是生物基因工程技术中的一种操作的程序。
1、目标获取
从基因文库中获取:
(1)基因文库:将含有某种生物不同基因的许多DNA片段,导入受体菌的群体储存,各个受体菌分别含有这种生物的不同的基因,称为基因文库。
(2)基因文库的种类:1、基因组文库;2、部分基因文库。
利用PCR技术扩增目的基因:
(1)PCR含义:是一项在生物体外复制特定DNA片段的核糖合成技术。全称是多聚酶链式反应。
(2)PCR原理:DNA双链复制。
(3)前提条件:有一段已知目的基因的核苷酸序列,以便根据这一序列合成引物。
(4)扩增过程:目的基因DNA受热变性后解链为单链,引物与单链相应互补序列结合,在DNA聚合酶的作用下进行延伸,如此重复循环多次。
(5)结果:每次循环后的目的基因的量增加一倍,即成指数形式扩增。
人工合成:
如果基因较小,核苷酸序列又已知,可以通过DNA合成仪用化学方法直接人工合成。
2、载体构建
组成:目的基因、启动子、终止子、标记基因。
功能:使目的基因在受体细胞中稳定存在,并且可以遗传给下一代;2、使目的基因能够表达和发挥作用。
步骤:
⑴用一定的限制酶切割质粒,使之出现一个黏性末端切口。
⑵用同种限制酶切割目的基因,产生相同的黏性末端。
⑶将目的基因片段插入质粒切口,加入适量DNA连接酶,使目的基因与质粒形成重组质粒。
⑷基因表达载体的构成:目的基因+启动子+终止子+标记基因。
关于基因工程:
基因工程又称基因拼接技术和DNA重组技术,是以分子遗传学为理论基础,以分子生物学和微生物学的现代方法为手段,将不同来源的基因按预先设计的蓝图,在体外构建杂种DNA分子,然后导入活细胞,以改变生物原有的遗传特性、获得新品种、生产新产品的遗传技。
基因工程技术为基因的结构和功能的研究提供了有力的手段。它是生物工程的一个重要分支,它和细胞工程、酶工程、蛋白质工程和微生物工程共同组成了生物工程。所谓基因工程是在分子水平上对基因进行操作的复杂技术。
基因工程最突出的优点是打破了常规育种难以突破的物种之间的界限,可以使原核生物与真核生物之间、动物与植物之间,甚至人与其他生物之间的遗传信息进行重组和转移。人的基因可以转移到大肠杆菌中表达,细菌的基因可以转移到植物中表达。
A人工合成目的基因,利用DNA聚合酶将脱氧核糖核苷酸聚合到已知的DNA单链上,相当于DNA复制的过程,所以有DNA单链与脱氧核糖核苷酸的碱基互补配对; B目的基因与载体结合,用限制性核酸内切酶切割以后,粘性末端在DNA连接酶的作用下,按照碱基互补配对原则连接在一起(所以建议用同一种限制酶切割以确保有互补的粘性末端); C将目的基因导入受体细胞,这一操作是将带有目的基因的载体注入受体细胞,只是载体位置的转移,并没有复制转录和翻译过程。 D这个选项分开来看。目的基因的检测用带有荧光标记的基因探针(实质是DNA单链),与现有基因反应,如果探针与已有基因结合(看荧光标记),说明目的基因已经导入(DNA杂交试验),这一过程也是DNA的复制;另外,表达则是基因复制、转录和翻译生成蛋白质,所以必然有碱基互补配对。
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