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化学方法合成DNA片段是一种十分成熟和简便的技术，利用DNA合成仪，根据待合成的DNA片段预定的核苷酸序列，可自动地将4种核苷酸单体按3′→5′磷酸酯键连接成寡核苷酸片段。目前常用此方法合成引物、寡核苷酸接头（linker）以及基因片段等。
根据某基因测定的核苷酸序列，或者根据蛋白质氨基酸序列推导的核苷酸序列，可以化学合成相应的基因片段。不同的是组成基因的DNA片段一般比较长，先必须按基因的核苷酸序列化学合成几个200bp左右的DNA片段，然后采用酶促连接法再组装成为含完整目的基因的DNA片段。
主要包括磷酸二酯法和亚磷酸三酯法两种方法合成基因生段，磷酸二酯法的基本原理是，将两个分别在5′-或3′-末端带有适当保护碱基的脱氧单核苷酸连接起来，形成一个带有磷酸二酯键的脱氧二核苷酸；亚磷酸三酯法原理是将所要合成的寡聚核苷酸链的3′-末端先以3′-OH与一个不溶性载体，如多孔玻璃珠（CPG）连接，然后依次从3′-5′的方向将核苷酸单体加上去，所使用的核苷酸单体的活性官能团都是经过保护的，合成反应的一个循环周期分为脱保护基、偶联反应、封端反应和氧化作用四步反应。
化学合成寡聚核苷酸片段的能力一般局限于150200bp，而绝大多数基因的大小超过了这个范围，需要将较长的基因先几个合成较短的寡核苷酸片段后，再适当连接组装成完整的基因，而这往往使基因制备难度加大，而且化学基因合成相比之下比较价格昂贵，因此这种方法主要适用于已知核苷酸序列的、分子量较小的目的基因的制备。对于较长的基因的合成，可根据基因或氨基酸序列，将化学合成寡核苷酸方法与酶促合成DNA的方法结合起来，也可进行基因的人工合成，具体的操作为：首先化学合成多个含有80100个核苷酸的寡聚核苷酸；每个寡聚核苷酸片段之间有1924个核苷酸的重叠序列；再将各个寡聚核苷酸等量（摩尔浓度）混合，在DNA聚合酶（或emphasis：role=italicTaqemphasis酶）作用下，通过重叠延伸拼接技术（sequence：overlapped：extension，SOE-PCR），各寡聚核苷酸又作为模版，使单链部分补齐成为双链；DNA变性成单链，各单链寡聚核苷酸片段之间仍有1924个核苷酸的重叠序列，两个单链部分再经SOE-PCR补齐，获得双链。
如何采用PCR技术从生物材料中分离目的基因
1、首先加入纤维素酶和α-淀粉酶进行预处理。
2、其次通过比较不同密度梯度介质的分离效果，利用溴化钠密度梯度得到了高纯度的苏云金芽孢杆菌伴孢晶体蛋白。
3、最后待分离的混合物放入半透膜制成的透析袋中，再浸入透析液进行分离。
基因组DNA文库要怎样分离目的基因？
利用PCR技术获得基因的话有很多种：
1）没有内含子的基因，直接可以设计引物从DNA中扩增出来
2）有内含子的，可以利用RNA反转录得到的cDNA为模板，扩增获得
3）基因组测序没有完成的物种，可以利用RACE的方法获得相应的基因
除此之外，还有很多方法。
基因文库的构建是目前基因工程的核心工作，也是分离目的基因的常用方法之一。首先，将某生物体的全部基因组DNA用限制性内切酶或机械方法切割成大小合适的片段，并将这些片段与适当的载体进行体外重组；再引入到相应的宿主细胞中繁殖和扩增，从而获得所有阳性菌落，从理论上讲，这些重组子应包含有整个基因组DNA序列。
它提供全套遗传信息，即完整的基因组DNA，可以研究基因组中5′端控制基因转录的调控序列、内含子的分布和作用，以及重复序列的数量分布及大小，因此，称之为基因组文库（genomic：library）或基因文库（gene：library）（link：xlinkhref=i011902图4-20link）。构建高等植物基因组DNA文库时，通常采用λ噬菌体载体和黏粒载体。基因文库构建后，从文库中筛选基因的方法主要有核酸杂交法、免疫学检测法、DNA同胞选择法、PCR筛选法等。
应用λ噬菌体载体构建基因组DNA文库的一般操作程序主要包括（link：xlinkhref=i011902图4-20link）：（1）用适当的限制性内切酶消化基因组DNA，以得到约20kb的大片段。
（2）用限制性内切酶切割载体DNA，使载体形成与外源DNA相匹配的黏性末端。
（3）选用适当方法，去除λ噬菌体裂解生长非必需的内部片段。
（4）λ噬菌体载体臂与外源DNA大片段连接成较长的多联体。
（5）利用体外包装系统将多联体组装成完整的颗粒。
（6）重组噬菌体侵染大肠杆菌，形成大量噬菌斑，每一克隆中含有外源DNA的一种片段，全部克隆构成一个基因文库。
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