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解题思路:分析题图:图示表示利用基因工程生产胰岛素的过程,①表示基因表达载体的构建过程,该过程需要限制酶和DNA连接酶;②表示将目的基因导入受体细胞的过程;③表示目的基因在受体细胞中表达;④表示蛋白质的加工过程.
(1)获取真核生物的目的基因一般选择从cDNA文库中获取.
(2)将目的基因导入微生物细胞时,需要用Ca2+(或CaCl2)处理微生物细胞,使之处于易于吸收周围环境中DNA分子的感受态.
(3)质粒上含有青霉素抗性基因,所以可以用含有青霉素的选择培养基筛选含有目的基因的大肠杆菌;对培养基应采用高压蒸汽灭菌.
(4)检测目的基因是否翻译形成相应的蛋白质,应采用抗体-抗原杂交方法检测.大肠杆菌是原核生物,没有内质网和高尔基体,不能对胰岛素原进行加工,因此不能产生具有活性的胰岛素.
故答案为:
(1)cDNA
(2)Ca2+ 或CaCl2
(3)青霉素高压蒸汽
(4)抗体抗原杂交(或抗体抗原特异结合)否 大肠杆菌无内质网和高尔基体
,5,利用基因工程生产胰岛素的过程如下图,据图回答:
(1)获取胰岛素基因,应选择从______文库中获取.
(2)将重组质粒导入大肠杆菌中,一般用______处理大肠杆菌使其处于感受态.
(3)对含有目的基因的大肠杆菌筛选,应制备选择培养基,除营养成分外还应加入______,对培养基应采用______灭菌.
(4)转基因大肠杆菌是否产生了胰岛素原,应采用______方法检测.大肠杆菌能否产生有活性的胰岛素?______,原因是______.
首先,第一问,DNA连接酶对两端序列没有专一性要求。DNA被切开,暴露的单链部分的碱基会根据碱基互补配对原则在DNA连接酶的督促下又联合成双联,这样就连一起了。
图中目标基因的X端和载体质粒的M端都是被ECORI酶切割后暴露的单链部分。当目标DNA片段镶嵌到质粒中时,X端与M端就配对成双连,这样就形成了完整的新的又能被ECORI酶切割的一段序列。再加上质粒本身就有没有被破坏的PSTI酶可以切割的序列。所以重组质粒有两个可以切的地方:EcoRⅠ酶对应序列、PstⅠ酶对应序列。
用EcoRⅠ和PstⅠ酶切时,两种酶都有对应可以切的序列。所以重组质粒被切两刀!得到两种产物!采用EcoRⅠ和SmaⅠ酶切,只有EcoRⅠ酶可以切的地方,没有SmaⅠ酶可以切的地方,所以重组质粒只被EcoRⅠ切了一刀,得到一种产物!
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