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基因工程基本操作步骤，需要经历四步。目的基因获取→基因表达载体构建→目的基因导入受体细胞→目的基因检测与鉴定。
基因工程又称基因拼接技术和DNA重组技术，是以分子遗传学为理论基础，以分子生物学和微生物学的现代方法为手段，将不同来源的基因按预先设计的蓝图，在体外构建杂种DNA分子，然后导入活细胞，以改变生物原有的遗传特性、获得新品种、生产新产品的遗传技术。基因工程技术为基因的结构和功能的研究提供了有力的手段。
（1）基因工程的基本操作程序主要包括四个步骤，其中核心步骤是______；PCR技术扩增目的基因是基因工程中
基因工程的基本操作步骤主要包括四步：1、目的基因的获取。2、基因表达载体的构建。3、将目的基因导入受体细胞。4、目的基因的检测与表达。其中，构建基因表达载体是基因工程的核心步骤。
解析：基因工程技术的基本步骤：1、目的基因的获取：方法有从基因文库中获取、利用PCR技术扩增和人工合成。
2、基因表达载体的构建：是基因工程的核心步骤，基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子和标记基因等。
3、将目的基因导入受体细胞：根据受体细胞不同，导入的方法也不一样．将目的基因导入植物细胞的方法有农杆菌转化法、基因枪法和花粉管通道法。将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法。将目的基因导入微生物细胞的方法是感受态细胞法。
4、目的基因的检测与鉴定：分子水平上的检测：检测转基因生物染色体的DNA是否插入目的基因DNA分子杂交技术。检测目的基因是否转录出了mRNA分子杂交技术。检测目的基因是否翻译成蛋白质抗原抗体杂交技术。个体水平上的鉴定：抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等。
（1）基因表达载体的构建是基因工程的核心步骤；PCR技术是在模板DNA、引物和四种脱氧核糖核苷酸存在下，依赖于DNA聚合酶的酶促合成反应，因此这一技术的原理是DNA双链的复制．
（2）植物组织培养的主要原理是植物细胞具有全能性，该过程是在无菌和人工控制条件下，将离体的植物器官、组织、细胞培养在人工配制的培养基上，给予适宜的条件，诱导其经过脱分化产生愈伤组织，再再分化形成完整的植株的过程．
（3）克隆动物实际上是用核移植方法得到的动物，也就是将一个细胞的细胞核，移入一个已经去掉细胞核的卵母细胞中，使其重组并发育成一个新的胚胎，最终发育为动物个体．
（4）生态工程是实现循环经济最重要的手段之一，它遵循的基本原理有：物质循环再生原理、物种多样性原理、协调与平衡原理、整体性原理、系统学和工程学原理．
（5）A、基因工程产生的自然界原有的蛋白质，而蛋白质工程能制造出新的蛋白质，A错误；
B、动物细胞培养时通常需发添加血清或血浆，B正确；
C、动物胚胎移植时，通常要在体外培养到桑椹胚或囊胚，C错误；
D、DNA连接酶和DNA聚合酶不是同一种酶，D错误．
故答案为：
（1）基因表达载体的构建?DNA双链的复制
（2）全能性?无菌?脱分化
（3）核移植?卵母
（4）循环物质循环再生原理、物种多样性原理、协调与平衡原理、整体性原理、系统学和工程学原理
（5）B
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