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| (1)Ⅱ Ⅰ(Ⅰ和Ⅱ) → ?DNA连接酶 否 (2)启动子、终止子? 在受体细胞中稳定存在，并且可以遗传给下一代能够表达和发挥作用 (3)四环素 (4)DNA分子杂交技术1/2? 抗虫棉发生基因突变 棉铃虫等害虫的抗性增强 |
获得转基因抗虫棉用到的生物技术是
| (1)Ⅱ? Ⅰ(Ⅰ和Ⅱ) (2)四环素 (3)让害虫吞食转基因棉花的叶片，观察害虫的存活情况，以确定其是否具有抗虫性状 3/4 (4)植物组织培养 发育成完整个体的全部遗传物质 |
抗虫棉的培育步骤
1.目的基因的提出，导入质粒DNA中，扩增培养（均是基因工程下游技术）
2.利用转基因技术将带有目的基因的质粒导入到抗虫棉中
3.利用植物组织培养技术，逐级培养导入目的基因后的抗虫棉植株中
4.后期通过驯化后，放在自然环境下培养，扩大规模等等。。。
将抗虫植物的抗虫基因用限制性内切酶“切下”，导入棉花基因中，再用酶将抗虫基因与棉花基因连接起来，最后培养成植株，得到的棉花就是抗虫棉。
抗虫棉分为转基因单价抗虫棉和转基因双价抗虫棉。 转基因单价抗虫棉是将一种细菌来源的、可专门破坏棉铃虫消化道的Bt杀虫蛋白基因经过改造，转到了棉花中，使棉花细胞中存在这种杀虫蛋白质，专门破坏棉铃虫等鳞翅目害虫的消化系统，导致其死亡，而对人畜无害的一种抗虫棉花。
其核心技术于1995年申请国家发明专利，1998年正式授权，2001年该专利被国际知识产权组织及国家知识产权局授予发明专利金奖。它标志着我国成为继美国之后，世界上独立自主研制成功抗虫棉的第二个国家。
抗虫棉之所以抗虫，是因为外源Bt基因整合到棉株体中后，可以在棉株体合成一种叫δ-内毒素的伴孢晶体，该晶体是一种蛋白质晶体，被鳞翅目等敏感昆虫的幼虫吞食后，在其肠道碱性条件和酶的作用下，或单纯在碱性条件下，伴孢晶体能水解成毒性肽，并很快发生毒性。
毒性发作的大致过程是，δ-内毒素被昆虫取食后，在昆虫中肠内溶解为前毒素，经中肠蛋白酶水解，释放出活力片段。活力片段穿过围食膜，与中肠上皮细胞刷状缘膜的受体结合，进一步插入膜内，形成孔洞或离子通道。引起离子渗透，水随之进入中肠细胞，导致细胞膨胀破裂。
另外，离子梯度的破坏，也扰乱了中肠内正常的跨膜电势及酸碱平衡，影响养分的吸收。使幼虫停止取食、麻痹，最后死亡。由于人体和多数动物的胃肠是酸性的，因此，这类蛋白对人体和多数动物无毒。
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