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基因工程所涉及的过程可用“分(或合成)、切、连、转、选、鉴”六个字表示。
分(或合成)是指DNA的制备,包括从生物体中分离或人工合成;切是在体外将DNA进行切割,使之片段化或线性化;连是在体外将不同来源的DNA分子重新连接起来,构建重组DNA分子;转是将重组连接的DNA分子通过一定的方法重新送入细胞中进行扩增和表达;选是从转化的群体中将所需要的目的克隆挑选出来;鉴就是对筛选出来的重组体进行鉴定。
图4-1:基因工程的操作过程
基因工程的基本操作程序的内容如下:
基因工程的基本操作程序指的是生物基因工程技术中的一种操作的程序。
1、目标获取
从基因文库中获取:
(1)基因文库:将含有某种生物不同基因的许多DNA片段,导入受体菌的群体储存,各个受体菌分别含有这种生物的不同的基因,称为基因文库。
(2)基因文库的种类:1、基因组文库;2、部分基因文库。
利用PCR技术扩增目的基因:
(1)PCR含义:是一项在生物体外复制特定DNA片段的核糖合成技术。全称是多聚酶链式反应。
(2)PCR原理:DNA双链复制。
(3)前提条件:有一段已知目的基因的核苷酸序列,以便根据这一序列合成引物。
(4)扩增过程:目的基因DNA受热变性后解链为单链,引物与单链相应互补序列结合,在DNA聚合酶的作用下进行延伸,如此重复循环多次。
(5)结果:每次循环后的目的基因的量增加一倍,即成指数形式扩增。
人工合成:
如果基因较小,核苷酸序列又已知,可以通过DNA合成仪用化学方法直接人工合成。
2、载体构建
组成:目的基因、启动子、终止子、标记基因。
功能:使目的基因在受体细胞中稳定存在,并且可以遗传给下一代;2、使目的基因能够表达和发挥作用。
步骤:
⑴用一定的限制酶切割质粒,使之出现一个黏性末端切口。
⑵用同种限制酶切割目的基因,产生相同的黏性末端。
⑶将目的基因片段插入质粒切口,加入适量DNA连接酶,使目的基因与质粒形成重组质粒。
⑷基因表达载体的构成:目的基因+启动子+终止子+标记基因。
关于基因工程:
基因工程又称基因拼接技术和DNA重组技术,是以分子遗传学为理论基础,以分子生物学和微生物学的现代方法为手段,将不同来源的基因按预先设计的蓝图,在体外构建杂种DNA分子,然后导入活细胞,以改变生物原有的遗传特性、获得新品种、生产新产品的遗传技。
基因工程技术为基因的结构和功能的研究提供了有力的手段。它是生物工程的一个重要分支,它和细胞工程、酶工程、蛋白质工程和微生物工程共同组成了生物工程。所谓基因工程是在分子水平上对基因进行操作的复杂技术。
基因工程最突出的优点是打破了常规育种难以突破的物种之间的界限,可以使原核生物与真核生物之间、动物与植物之间,甚至人与其他生物之间的遗传信息进行重组和转移。人的基因可以转移到大肠杆菌中表达,细菌的基因可以转移到植物中表达。
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